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RT/RT-PCR

HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit

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25087 96 tubes up down 165,000원
PRODUCT INFORMATION
Description

HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit은 RT 반응에서 제일 중요한 first-strand cDNA 합성에 필요한 모든 구성품이 한 튜브에 섞여 건조된 pellet 형태의 제품으로 뛰어난 민감도를 바탕으로 모든 first-strand cDNA 합성에 특화된 제품

  • • Highest sensitivity : Reduced RNase H activity
  • • cDNA 합성 과정에서 생성되는 RNA/DNA hybrid를 분해하는 RNase H 활성이 없어 좀 더 뛰어난 활성을 보여주어
       first-strand cDNA 합성에 높은 민감도를 보유 (total RNA 최소 1 pg, mRNA 최소 0.01pg)
  • • Oligo(dT) primer와 Random hexmer가 함께 구성되어 있어 여러 RNA 유형에 구애받지 않고 사용이 가능
  • • All-in-one 제품
  • • RT 반응에 필요한 모든 시약들이 한 tube에 dried pellet 상태로 PreMix 화 되어 RNA와 물만 첨가하여 바로 수행
  • • 기본 42℃에서 30분에서 한 시간 동안의 RT 반응으로 극소량의 RNA까지 cDNA로 합성 가능

HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit 제품은 모든 종류의 RNA에 뛰어난 민감도를 가지고 있어 RT 반응의 척도인 first-strand cDNA 합성에 특화된 제품입니다.
제품에 사용된 RTase는 RT 반응의 첫 단계인 first-strand cDNA 합성하는 과정에 생성되는 RNA/DNA 혼성 사슬을 잘라내어 cDNA의 합성을 방해하는 RNase H
활성을 유전공학적 기술로 변형시켜 소멸시킨 RT 효소인 RevoScript™ RH(-) RTase가 첨가되어 있습니다. 또한 RevoScript ™ RTase는 가장 많이 사용되고 있는 M-MLV와 비교하여 높은 내열성을 지니고 있어 이차 구조를 이루기 쉬운 RNA들의 cDNA 합성에 유용함을 가지고 있습니다.

HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit은 RT 반응에 최적으로 조성돼 있어 사용자들의 optimization을 최소화하였으며 PCR과 같은 후속 실험 분석에 바로 사용이
가능하도록 준비되어 있습니다. 또한 Random hexamer나 Oligo (dT) 15가 함께 혼합되어있어 RNA의 유형에 구애받지 않고 모든 RNA에 즉시 사용이 가능합니다.
이러한 제품 특징뿐 아니라 자사의 dried PreMix 기술이 적용되어 RT 반응에 필요한 각 구성요소 간의 최적의 안정성 유지를 바탕으로 변함없는 민감도와 RT 반응 활성을 제공하며, 극대화된 사용 편의성이 적용되어 높은 재현성을 보여줍니다.

Applications
  • 01RNA 발현연구
  • 02질병균의 분자진단
  • 03RNA virus 연구
  • 04RNA qualification 분석
Kit Contents
Contents Volumes
HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit 48 tubes
Instruction Manual 1 ea

Component in 20 ml reaction

  • •Revoscript™ RH(-) RTase
  • •dNTP Mix, MgCl2
  • •RNase inhibitor
  • • RT Reaction Buffer , RT Enhacer
  • •Primer – Random hexamer, Oligo (dT)15
Technical Data

Highest sensitivity : Reduced RNase H activity


 

HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit에 적용된 RevoScript™ RH(-) RTase는 RT 반응의 첫 단계인 first-strand cDNA 합성하는 과정에
생성되는 RNA/DNA hybrid을 잘라내어 cDNA의 합성을 방해하는 RNase H 활성이 없어 다른 RTase와 비교하여 좀 더 뛰어난 활성을 보여주어 first-strand cDNA 합성에 높은 민감도를 보유하고 있습니다. 또한, HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit은 최적 RT 반응 조성으로 조성되어 있어 최소 1 pg의 total RNA, 또는 10 fg의 poly(A) tail mRNA까지도 first-strand cDNA 합성이 가능한 높은 민감도를 보여주고 있습니다.

Human total RNA serially diluted from 10 ng to 10 fg (10-fold serial dilution), RT reaction temperature at 42ºC at 1 hr, After cDNA synthesis, 1.6kb (18s rRNA) of DNA fragment was amplified with the Maxime PCR PreMix Kit (i-Taq) (iNtRON. Cat. 21131).

High cDNA synthesis efficiency with difficult or high GC-content template


 

HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit은 뛰어난 민감도뿐만 아니라 total RNA와 같은 다양한 종류의 RNA들이 혼재해 있는 template에서도
어려움 없이 모든 RNA로부터 first-strand cDNA 합성이 가능합니다. 이는 RevoScript™ RH(-) RTase의 자체적으로 보유한 온도 안정성에
추가적으로 유전공학적 기술로 RNase H 활성 감소가 이를 가능하게 하였으며, RT반응에 필요한 buffer 조성들이 최적의 조성으로 자사의
Maxime PreMix 기술을 적용되어 사용자들의 optimization을 최소화하였으며 후속 실험 분석에 바로 사용이 가능하도록 준비되어 있습니다.
이를 바탕으로 RNA 유형에 구애받지 않고 cDNA 합성이 가능하여 RNA 발현 확인 및 cDNA library 확보, 분자진단 등의 다양한 분석 실험에
적용이 가능합니다.

Human total RNA serially diluted from 1 ng to 10 pg (10-fold serial dilution), RT reaction temperature at 42ºC at 30min, After cDNA synthesis, the 1.3kb(left; 18s rRNA) and 575 bp(right; GAPDH) of DNA fragment was amplified with the Maxime PCR PreMix Kit (i-Taq) (iNtRON. Cat. 21131).

Comparison of RT efficiency : Thermal stability


 

HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit 제품에 포함된 RevoScript™ RH(-) RTase는 조류 Retrovirus 유래 RTase로 유전공학적 기술을 이용하여 RT 반응의 첫 단계인 first-strand cDNA 합성하는 과정에 생성되는 RNA/DNA hybrid double strand를 잘라내어 cDNA의 합성을 방해하는 RNase H 활성을 소멸시킨 RT 효소입니다. 또한 RevoScriptRH(-) RTase는 필드에 가장 많이 사용되고 있는 M-MLV RTase와 비교하여 뛰어난 내열성을 갖추고 있어 RT 반응 중에 이차 구조를 이루기 쉬운 RNA의 cDNA 합성반응에 유용함을 가지고 있습니다.

Human total RNA serially diluted from 1 ng to 10 pg (10-fold serial dilution), RT reaction temperatures in37℃, 42℃, 45℃, 50℃ at 30min, After cDNA synthesis, the 1.3kb(18s rRNA) of DNA fragment was amplified with the Maxime PCR PreMix Kit (i-Taq) (iNtRON. Cat. 21131).

TroubleShooting Guide
QGene expression analysis 실험을 위하여 RT-PCR를 시도하려고 합니다. 기존 M-MLV를 이용한 매뉴얼 RT 반응과 비교하여 HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit 의 특징은 어떤 것이 있습니까?
A기존 매뉴얼 방식의 RT 반응으로 정량적 분석이 필요한 실험을 진행하기에는 각 dNTP, primer, buffer등등을 모두 일일이 섞어 사용함에
따른 오차로 인하여 재현성 확보에 어려움이 있습니다. HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit은 오직 한 tube에 RT 반응에 필요한 모든
조성과 RT enhancer가 최적 조성으로 Dry premix 형태로 제고되고 있어 RNA와 물만 추가하여 RT 반응을 바로 수행 할 수 있습니다.
이는 사용자의 Optimizing을 간소화하여 항상 최적의 결과를 모든 실험에서 일정하게 얻을 수 있도록 도움을 줄 것입니다.
Q다량의 total RNA를 이용하여 RT를 수행하였지만, 후속으로 진행한 PCR에서 증폭량이 매우 적게 나오고 있습니다. 어떻게 하여야 원하는
목표 RNA의 cDNA를 얻을 수 있을까요?
AcDNA 합성의 경우 template RNA의 양을 많이 투입하여 다량의 cDNA를 얻기 힘든 경우가 많습니다. 특히 total RNA를 가지고 실험하는 경우 원하는 RNA보다 훨씬 많은 ribosomal RNA와 Transfer RNA들이 혼재되어 있어 cDNA 합성에 어려움이 있습니다.
고순도로 RNA를 추출하여 100ng 이하로 RT 반응을 진행하면 더 좋은 결과를 얻으실 수 있을 것입니다.
QRT 반응 시 꼭 20㎕로만 반응을 진행하여야 하나요?
AHiSenScript™ RH(-) cDNA Synthesis Kit은 Solution 형태의 제품으로 2X RT reaction Solution과 Enzyme Mix Soution을 각 농도의 비율에 맞게 추가하여 원하시는 부피로 실험을 진행하면 cDNA를 얻으실 수 있습니다.
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