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PCR

Maxime™ PCR PreMix (i-MAXⅡ)

Cat.No 용량 주문수량 판매가
25265 96 tubes up down 150,000원
PRODUCT INFORMATION
Description

Proof-reading 기능을 가지고 있어 작은 size DNA부터 20 Kb 이상의 DNA까지 증폭이 가능하며 높은 감도, 정확성, 낮은 에러율을 가진
Dried & aliquoted PreMix Kit

  • • Dried & aliquoted PreMix, All-in-one 제품
       - 반응에 필요한 모든 시약이 tube 하나에 dried pellet 상태로 되어 있음
       - Template 및 primer만 첨가하여 바로 PCR 수행
       - Gel loading dye가 포함되어 있어 바로 전기영동 가능
  • • 제품 안정성 및 재현성이 매우 우수함
       - ALHP system에 의한 dried & aliquoted PreMix로 재현성 우수
       - 진공압축제조공법에 의해 산화 및 수분방지로 안정성 우수
  • • 높은 정확성 및 낮은 에러율 가짐
       - Proof-reading 활성이 있어 장편의 DNA template 증폭 가능
       - 긴 template DNA 및 짧은 template DNA의 증폭에 대한 높은 증폭효율 보장
  • • 클로닝된 DNA, 인체 genomic DNA 뿐만 아니라 GC-rich 또는 looped sequences등의 증폭이 어려운 template 에 이르기까지
       다양한 DNA에 적용 가능

Maxime™ PCR PreMix Kit(i-MAX™ II)는 i-MAX™ II DNA Polymerase를 포함하여 PCR 반응에 필요한 모든 구성요소(dNTP mixture, reaction buffer 등)가 ALHP system에 의해 각각의 PCR tube에 포함되어 dried pellet 상태로 되어 있기 때문에 실험자간의 pipetting에 오는 실험 오차를 현저히 줄일 수 있어 재현성이 매우 우수하며 진공압축제조공법에 의해 제품 내의 주요 구성 성분의 산화 및 수분방지로 인하여 활성 안정성이 매우 뛰어난 제품이라 할 수 있습니다.

또한 본 제품은 template DNA, Primer set 그리고 D.W만 첨가하여 PCR을 할 수 있고, Gel loading buffer가 들어가 있어 다른 어떠한 처리 없이 gel loading을 할 수 있습니다. 본 제품에 사용된 i-MAX™ II DNA Polymerase는 Taq DNA Polymerase와 Pfu DNA Polymerase의 장점을 취하여 각 효소의 단점을 극복하고 새로운 기능을 얻은 효소로써 proof-reading 기능을 가지고 있어 작은 size DNA(4~5 Kb 이하)부터 20 Kb 이상의 DNA까지 증폭이 가능합니다. 각 효소 별로 장단점은 다음과 같습니다. Taq DNA Polymerase는 template가 5 Kb를 넘는 경우 증폭 효율이 현저히 떨어지며 주형의 종류에 따라 다르기는 하지만 10 Kb나 그 이상의 DNA 주형은 증폭하기 어렵습니다. 이런 현상은 Taq DNA Polymerase에 proof-reading 활성이 없기 때문으로, DNA 합성과정에서 mismatched nucleotide가 삽입되는 경우 template에서 떨어져서 중합에 실패하기 때문입니다. Taq DNA Polymerase의 이러한 결함은 교정기능이 있는 내열성 DNA polymerase를 함께 사용함으로써 극복될 수 있습니다. 이러한 교정 기능은, DNA Polymerase가 중합반응을 진행하는 중에 mismatched(상보적이지 않은) nucleotide가 끼어든 경우 이를 제거하고 상보적인 nucleotide로 교정할 수 있다는 것입니다. 이러한 활성은 Taq DNA Polymerase보다 더 정확한 염기서열의 PCR 산물을 얻을 수 있도록 하기도 하지만, Taq DNA Polymerase에 비하여 더 긴 DNA template를 증폭할 수 있도록 해줍니다. 이러한 교정기능이 있는 내열성 DNA Polymerase 중 대표적인 효소가 Pfu DNA Polymerase로 일반적인 Taq으로는 증폭이 어려운 긴 size의 PCR(up to ~ 30 Kb)에 적합한 효소로 일반 Taq DNA Polymerase에 비해 높은 fidelity와 proof-reading 기능을 가지고 있습니다. 하지만 Pfu DNA Polymerase는 중합효율이 떨어져 DNA 중합에 더 많은 시간을 필요로 한다는 단점을 가지고 있습니다.

Maxime™ PCR PreMix Kit(i-MAX™ II)는 위와 같은 Taq DNA Polymerase와 Pfu DNA Polymerase의 장점을 취한 i-MAX™ II DNA Polymerase를 사용하여 작은 size(4~5 Kb 이하) 뿐만 아니라 긴 size에서의 증폭률을 증가시켰음은 물론, 민감도 부분에서도 우수한 결과를 나타낼 뿐만 아니라 PCR 반응에 필요한 모든 구성요소가 하나의 tube에 dried pellet 상태로 되어 있어 여러 가지 sample에 대해 매우 빠르고 간단하게 실험하실 수 있는 제품입니다.

Applications
  • 01General PCR
  • 02Human genomic DNA와 같이 까다로운 template나 primer에 대한 PCR
  • 03긴 DNA fragment의 증폭 : 20 Kb 까지 증폭
  • 04TA Cloning & Blunt Cloning, etc.
Kit Contents
Content 25185
Maxime™ PCR PreMix Kit(i-MAX II, for 20 ul rxn) 96 tubes

참고. Maxime™ PCR PreMix Kit(i-MAX II)

Technical Data

다양한 size별 증폭 효율 관찰

Maxime™ PCR PreMix Kit(i-MAX™ II)의 증폭 효율을 관찰하기 위하여 87 bp에서 20 Kb까지의 다양한 size를 증폭한 결과입니다.
모든 size 에서 양호한 증폭 효율을 볼 수 있습니다.

[ Panel A ] Using various template
Lane M1, 100bp Ladder DNA Marker; lane M2, 1Kb Ladder DNA Marker; lane 1, 87bp; lane 2,200bp; lane 3, 570bp, lane 4, 1Kb; lane 5, 1.3Kb;
lane 6, 1.8kb; lane 7, 2Kb; lane 8, 2.7Kb; lane 9, 4.5Kb; lane 10, 9Kb; lane 11, 17.5Kb; lane 12, 20Kb
[ Panel B ] Using only human gDNA template
Lane M1, 1Kb Ladder DNA Marker; lane M2, λ/Hind III Marker; lane 1, 1.8Kp; lane 2, 2Kb; lane 3, 2.7Kb, lane 4, 17.5Kb

TroubleShooting Guide
Q식물에서 genomic DNA를 추출하여 TA cloning을 하기 위해 taq을 찾던 중 i-MAXII™가 이전 결과와 유사한 PCR 패턴을 보여 사용하였으나 cloning이 잘 되지 않습니다.
A당사의 i-MAXII™의 경우 long PCR용으로 디자인된 제품이지만 TA cloning도 가능합니다. 그러나 작은 size의 products를 TA cloning
하실 경우, i-MAXII™ 보다는 TA-cloning에 적합하게 제작된 i-Taq™ 제품을 권장드립니다.
Qeasy-spin으로 RNA를 추출한 뒤, Maxime RT 제품으로 cDNA 합성하였습니다. i-MAXII™를 사용하여 PCR을 진행하였는데 PCR 효율이 좋지 않습니다.
A당사의 제품을 사용해 주셔서 감사합니다. cDNA를 합성한 후, PCR 진행 시 template양이 많으면 오히려 PCR 저해요인이 될 수 있습니다. 그러므로 template양을 줄여서 실험을 진행하신다면 보다 좋은 결과를 얻으실 수 있습니다.
Q홈페이지에 i-MAXII™의 fidelity가 높다고 나와 있는데, i-pfu™와 비교하여 error rate는 어떻게 되나요?
Ai-StarMAXII™의 error rate는 1.8X10-8입니다. i-pfu™의 경우 1X10-6입니다.
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