Description

Hot-start 기능을 가지면서 proof-reading 기능을 가지고 있어 고감도 및 정확한 증폭이 가능한 PCR core Kit

• • 높은 정확성과 특이도 및 낮은 에러율
     - i-StarTaq™ DNA polymerase의 Hot-start 기능 추가
     - Proof-reading 활성이 있어 장편의 DNA template 증폭 가능
     - 긴 template DNA 및 짧은 template DNA의 증폭에 대한 높은 증폭효율 및 고민감도
• • 클로닝된 DNA,인체 genomic DNA 뿐만 아니라 GC-rich 또는 looped sequences등의 증폭이 어려운 template에 이르기까지 다양한
     DNA에 적용 가능

i-StarMAX™ II DNA Polymerase는 Hot-start 기능이 있어 비특이적인 반응을 현저히 줄었으며 Proof-reading 기능이 있어 error rate를 낮춰 20 Kb 이상의 긴 template의 PCR에 매우 유용한 제품입니다. Taq DNA Polymerase는 37℃에서도 그 활성이 좋기 때문에 간혹 첫 번째 denaturation 과정이 완전히 진행되기도 전에 primer가 DNA molecule에 붙어서 extension이 일어나는 경우가 있습니다. 이렇게 낮은 온도에서 annealing이 일어날 경우 primer가 mismatch할 확률이 높고,
따라서 결과적으로 정확도가 떨어지는 band를 얻게 될 수 있습니다.

Forward 또는 reverse primer 어느 하나가 특이성이 떨어진다거나 두 primer가 primer dimer를 만들려는 경향이 강한 경우 이러한 현상이 나타나는데 이것을 막는 방법이 Hot-start PCR로 고온에서만 Taq DNA Polymerase가 활성화 되어 PCR의 특이성과 감도를 상승시키는 것을 이용하는 것입니다. Hot start PCR에서는 primer가 정확하게 원하는 DNA site에만 붙을 수 있도록 PCR에 필수적인 요소들(ex. polymerase, MgCl₂, dNTP)의 활성을 막고 있다가 반응물의 온도가 높아지면 활성을
띄게 함으로써 nonspecific priming이나 oligomerization을 막는 것입니다. 이렇게 하면 위에서 말한 것과 같은 mismatch를 피할 수 있어, 상대적으로 clear한 band를 얻을 수 있습니다.

위와 같이 i-StarMAX™ II DNA Polymerase는 hot-start 기능의 i-StarTaq™ DNA Polymerase와 Proofreading DNA Polymerase가 혼합된 효소로서, 비특이적 반응과 error rate를 현저히 줄여주고, 20 kb 이상의 긴 template를 PCR 하는데 아주 유용합니다. 또한 까다로운 template/primer 시스템에도 유용하며, PCR 시 extension 시간을 kb당 30~60초 정도로 설정하여 높은 yield의 PCR 산물을 얻을 수 있습니다. i-StarMAX™ ll DNA Polymerase는 proofreading DNA polymerase만으로는 힘든 15 Kb이상의 PCR target에 대한 고성능 증폭과 비교적 빠른 PCR을 원하실 때 적합합니다. 본 효소를 사용하여 증폭한 산물의 대부분은
3’ 말단에 염기 A가 하나 더 첨가되어있습니다.
따라서 PCR 산물을 그대로 T-vector에 클로닝 할 수 있을 뿐만 아니라, Klenow DNA polymerase나 T4 DNA polymerase 같은DNA polymerase로 말단을 채워 blunt end로 만들고 인산화를 통해 blunt-end vector에도 클로닝 할 수 있습니다.

Applications

• 01General PCR
• 02질병 진단
• 03SNP analysis
• 04Human genomic DNA와 같이 까다로운 template나 primer에 대한 PCR
• 05Multi-plex PCR
• 06TA Cloning & Blunt Cloning, etc.

Kit Contents

Technical Data

i-StarMAX™ II DNA polymerase의 다양한 template와 size별 민감도 활성을 확인하였습니다. 타사 동일 기능의 Hot-start Taq DNA Polymerase보다 민감도 및 증폭 효율이 높음을 확인 하였습다.

Lane M, 100 bp Ladder DNA Marker; lane 1, 100 ng genomic DNA; lane 2, 5-¹ diluted genomic DNA; lane 3, 5-² diluted genomic DNA; lane 3, 5-³ diluted genomic DNA; lane 4, 5-⁴ diluted genomic DNA; lane 5, 5-⁵ diluted genomic DNA; lane 6, 5-⁶ diluted genomic DNA; lane 7, 5-⁷ diluted genomic DNA

DNA 증폭에 있어서 민감도(sensitivity)를 측정하기 위해 타사 동일 기능의 제품들과 i-StarMAX™ II DNA Polymerase를 비교하였습니다.
결과에서 볼 수 있듯이, i-StarMAX™ II DNA Polymerase는 타사제품에 비해 적은 양의 DNA에서 효과적으로 증폭하고 있음을 알 수 있습니다.

Lane M1, 100 bp Ladder DNA Marker; lane 1, 25 ng gDNA; lane 2, 5 ng gDNA; lane 3, 1 ng gDNA; lane 4, 200 pg gDNA; lane 5, 40 pg gDNA; lane 6, 8 pg gDNA