Description

그람 음성 세균의 세포 외벽에 존재하는 LPS를 분리/정제할 수 있는 제품

• • 그람 음성 세균 내 존재하는 LPS 분리/정제
• • Phenol-water 방식의 LPS 추출
• • 단백질, 핵산 등의 오염원 제거가 효과적임
• • 가장 효율적이며 간편하게 LPS를 추출 할 수 있는 제품
• • LPS를 추출하는 전 과정이 최대 60분내에 완료 

LPS Extraction Kit는 Gram-negative bacteria의 세포 외벽에 존재하는 LPS를 분리/정제할 수 있는 제품입니다. 일반적으로 Gram-negative bacteria는 cell envelope의 external layer에 phospholipid와 단백질 외에 lipopolysaccharide (LPS)라는 별도의 구조를 보유하고 있고, 이것이 bacteria 마다 특성을 달리하고 있습니다. 이와같은 LPS는 박테리아의 성장이나 생존 등에 중요한 역할을 수행함은 물론, 특히 host와 parasite간의 interaction에 있어서 많은 역할을 수행하는 것으로 알려져 있습니다. 또한, LPS는 septic shock가 가해졌을때, endotoxin을 분비하게 함으로써 peripheral vascular collapse를 가져오게 하는 등 면역반응과 밀접한 관련이 있는 것으로 이해되며, 더불어 toxic pathophysiological한 반응에 중요합니다. 이러한, LPS는 bacteria마다 추출 패턴이 다르고, 이를 통해서 bacteria를 계통학적으로 분리하기도 합니다. 앞서 언급한 바와 같이, 엔도톡신(bacterial endotoxin)은 일반적으로 Gram-negative bacteria 세포 외벽에 존재하는 물질로 bacteria가 살아있는 동안에는 발현되지 않지만 bacteria가 증식하거나 사멸할 때 세포의 벽이 깨지면서 외부로 방출됩니다. 자연상태의 entotoxin은 LPS, Proteins, Phospholipids로 구성되어 있으며 자연상태에서 대단히 안정하고 열에 강하며 음전하를 띄고, 큰 분자량(1,000,000 dalton 이상)을 가집니다. 일반적으로 protein은 Trichloroacetic acid, Butanol 또는 EDTA로 추출하여 lipid associated proteins(LAP)을 제거하고, phospholipids는 phenol을 이용하여 추출합니다. 통상적으로 LPS 추출을 시도할 경우 bacterial dry weight당 1-4% 정도 LPS를 얻을 수 있습니다.
LPS Extraction Kit는 Phenol water method를 기반으로 하므로 entotoxin중의 단백질을 변성시켜 수층과 phenol 층의 사이에 침전물의 형태로 변성시켜 제거하며, Phenol/chloroform 분획으로 lipid 를 분리시키므로 신속하고 간편하게 높은 LPS 만을 추출할 수 있습니다

Applications

• 01LPS 구성 및 구조 연구
• 02세균의 계통학적 연구
• 03항생제 표적 연구
• 04LPS 저해 약물 설계 연구
• 05탄수화물 항원의 면역반응 연구

Kit Contents

Technical Data

5 OD₆₀₀의 각 G(-)균주로부터 LPS Extraction Kit를 사용하여 LPS를 추출한 후 추출된 LPS에 대해 Purpald Assay 를 사용하여 정량 하였으며, 그 결과 상기와 같은 추출 효율을 확인 할 수 있었습니다. 한편 단백질의 혼입 여부는 당사의 SMART™ Micro BCA Assay Kit를 사용하여 관찰하였으며 0.2 μg 미만의 오염도를 확인하였습니다.

여러가지 종류의 그람음성세균으로부터 추출한 LPS를 SDS-PAGE 한 후 Silver staining을 진행한 결과로서 다량체로 존재하는 LPS의 특징 및 다량체의 개수에 따라 Ladder 형태의 밴드 패턴이 관찰되며 이는 세균의 종류에 따라 패턴의 차이가 있음이 관찰됩니다.