“아무 일도 없다는 결과, 그게 가장 어려운 시험입니다.”

Mycoplasma 부정 시험은

양성을 찾기 위한 실험이 아니라,

실험 환경과 공정이 안전하다는 사실을 증명하는 시험입니다.

​e-MycoTM​ VALiD-Q Real-time (v3.0 PRO)​는​

DNA 추출부터 PCR증폭까지  

과정 전체의 유효성을 한 번에 검증합니다.

e-MycoTM​ VALiD-Q (v3.0 PRO) 바로 가기 

Mycoplasma Real-time PCR, 무엇을 확인하는 시험인가

세포는 정상처럼 자라고,

실험 데이터도 문제없이 쌓여갑니다.

- 시험 공정이 정상적으로 수행되었는지

- PCR 반응이 억제 없이 작동했는지

- 오염 없이 실험이 진행되었는지

이 모든 과정을 하나의 Real-time PCR 결과로 검증하는 시험입니다. 

e-MycoTM​ VALiD-Q (v3.0 PRO)는

Mollicutes(Mycoplasma,Acholeplasma,Spiroplasma)의

보존성 높은 16S rRNA 영역을 타깃으로 하여 

EP2.6.7 / USP <63> / JP G3 약전과 MFDS 기준에 부합하도록 설계 되었습니다.

한눈에 보는 Mycoplasma Real-time PCR 구성

Dual Control 설계를 통해 

DNA 추출 및 PCR 증폭 과정 전반의 유효성을 확인 할 수 있습니다.

적용 장비 및 형광 채널 호환성 

e-MycoTM​ VALiD-Q (v3.0 PRO)​는 다양한 real-time PCR 장비에서 검증되었습니다.

Dual Control 시스템을 통한 시험 과정 유효성 검증

Internal Control (IC)

·​ DNA 추출 및 PCR 증폭 과정의 정상 여부 확인

- DNA 추출 단계에 첨가하여 추출과 PCR 전 과정 검증 가능

- PCR Master Mix에 첨가하여 PCR 증폭 성능 모니터링 가능

·​ HEX(VIC/JUN)채널에서 검출

·​ 약전 기준 부정시험에 필수적인 검증 요소

· ​IC가 검출되지 않는 경우,DNA 추출 또는 PCR 증폭 단계의 유효성을 확인할 수 없음

External Control (EC)

·​ PC(Positive Control) 증폭 확인 및 오염 식별     

- PCR 시스템에서 타겟 채널이 모두 정상적으로 증폭되는지 확인 

- Positive control로부터의 carry-over contamination에 의해 발생하는 false-positive 결과 식별

·​ FAM + Cy5 채널 동시 검출 

·​ Cy5 신호를 통해 Positive control 오염을 식별하기 위한 지표   

Internal Control 핸들링 방법

자동화 추출 :샘플 시료 200 µL+ IC 16 µL 첨가→ Automated Nucleic acid Extraction system

매뉴얼 추출 :샘플 시료 200 µL +IC 10 µL 첨가→ G-spinTM​ Total DNA Extraction mini Kit 

PCR 단계 : 2x Master mix (10 µL) + Detection Solution(5 µL) + IC (1 µL) = 16 µL(15 µL 사용)       

                  Mixture 15 µL + Template(5 µL) = 샘플 결과

            ⇒​  PCR 단계에서 IC는 PCR 과정에 대해서만 유효성을 검증

PCR Mixture 핸들링 방법

샘플 : 2 x Master mix (10 µL) + Detection Solution (5 µL) + Template (5 µL) = 샘플 결과

PC  : 2 x Master mix (10 µL) + Detection Solution (5 µL) + IC (1 µL) = 16 µL (15 µL 사용)

       Mixture 15 µL + EC (5 µL) = PC 결과

NC ​ : 2 x Master mix (10 µL) + Detection Solution (5 µL) + IC (1 µL) = 16 µL (15 µL 사용)​

        Mixture 15 µL + DNase/RNase free Water (5 µL) = NC 결과

결과 해석

  1)  반응 무효

     - 부정시험에서는 IC로 추출과 PCR 단계의 유효성이 확인 되어야 하므로, DNA 추출부터  재시험 진행

       샘플 시료를 DPBS를 사용하여 1/100~1/10 희석하여 추출을 재시험

     - IC가 PCR단계에서만 첨가된 경우,핵산을 1/100 ~1/10 희석하여 PCR을 재시험 

  2)  반응 무효

     - 샘플에서 Cy5 시그널이 함께 검출 될 때만 EC에 의한 오염으로 재시험 진행

  3)  반응 무효

     - PC, NC에서 IC가 검출이 되지 않는 경우, IC가 절차대로 정확하게 첨가 되었는지 확인을 위한 재시험 진행

샘플 예시)

“안 나왔다는 결과에도, 기준은 분명해야 합니다.”

Dual Control 설계를 통해 

DNA 추출부터 PCR 증폭까지의 과정을 검증하고,

Carry-over contamination까지 구분하는 것.

보이지 않는 오염을 끝까지 확인하는 기준,

e-MycoTM​  VALiD-Q Real-time PCR Kit (v3.0 PRO)​​​ 입니다.