| 제목 | 혈액 DNA 추출 표준, G-DEX | 조회수 | 1581 |
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G-DEXTM IIb Blood DNA Extraction Kit Guide – “혈액 DNA추출, 변수를 통제하는 것이 핵심입니다.
- G-DEXTM IIb Genomic DNA Extraction kit (For Blood; 이하 G-DEXTM IIb) 솔루션
“Blood DNA Extraction이 까다로운 이유
⁃Blood는
분자실험실에서 가장 흔한 시료이지만, DNA 추출
관점에서는 구성 성분의 복잡성과 변동성이 매우 큰 시료입니다.
⁃RBC, 다양한
혈장
단백질, 항응고제 종류, 보관
조건의 차이는 DNA 순도와 재현성에 직접적인 영향을 미치며, 이로
인해 Blood DNA Extraction은 다른 시료 대비 공정 안정성이 특히 중요하게
요구됩니다.
⁃Blood
DNA 추출 과정에서 주로 관찰되는 이슈는 다음과 같습니다. ⁕
완전하지
않은 Cell Lysis
→ 수율의 급격한 감소 ⁕
완전히
제거되지
않는 RBC → 붉은 잔색,
purity 저하,
재용해
불량, PPT 침전과정에 영향 ⁕ pellet
과건조
→ 재용해 불량 ⁕ 장기보관 blood
→ DNA integrity 감소 Blood DNA Extraction, 실험 숙련도보다 ‘시약 시스템의 안정성’이 결과에 더 큰 영향을 미칩니다. “Blood DNA Extraction에서 우선적으로 고려해야 할 핵심 포인트.” Blood DNA 추출의 변수는 복잡해 보이지만, 실제 현장에서는 다음 세 단계의 안정화 여부가 품질을 좌우합니다.
TIP 1) RBC 제거 단계는 전체 추출 품질의 출발점입니다. RBC가 충분하게 제거되지 않으면 DNA 순도 저하, 단백질 침전 불안정, PCR 성능 저하로 이어질 수 있습니다. ⁕ RBC Lysis: 혈액 대비 3배 용량 + 5분 incubation ⁕ RBC 잔존 시 Lysis 단계 1회 추가 ⁕ pellet 회수 할 때, 50~100ul 잔액 → WBC resuspension 안정화
TIP 2) 단백질 침전(PPT) 단계의 혼합 조건이 중요합니다. PPT 단계에서의 혼합이 불충분할 경우, Protein pellet 경계가 불분명하게 형성 될 수 있습니다. ⁕ PPT buffer 첨가 후 강한 vortex 20초 ⁕ pellet이 불안정할 경우 → ice 5-10분 후 재원심
TIP 3) DNA pellet 건조 시간은 최소화해야 합니다. ⁕ 건조 시간 : 10-15분 권장 ⁕ 재용해 : 65℃ 30분~60분 또는 4℃ overnight
Buffy coat 사용 시에는 yield는 좋지만 세포량이 많아 더 예민합니다. 이 경우 Lysis buffer를 1.2~1.5배로 늘리고 PPT단계를 강화하면 훨씬 안정적입니다.
“왜 Blood 전용 DNA Extraction Kit가 필요한가.” Blood DNA Extraction은 일반 스핀 키트만으로 해결되지 않는 변수들이 존재합니다. 특히 대용량 Blood나 buffy coat에서는
시약 자체가 Blood 전용으로 설계되어 있지 않다면 품질 편차가 커질 수 밖에 없습니다.
바로 여기에서 인트론바이오 G-DEXTM IIb Blood Kit가 선택받는 이유가 명확해집니다.
“iNtRON G-DEXTM IIb Blood Kit의 설계 포인트.” G-DEXTM IIb 는 Blood 시료의 특성을 고려하여 다음과 같은 방향으로 설계 되었습니다. ⁕ 0.1 – 20mL blood까지 폭넓은 처리 범위 ⁕ RBC 제거 – Cell lysis – PPT – Hydration 전 구간에서 안정화된 반응성 ⁕ 항응고제(EDTA, Citrate, Heparin) 모두 호환 ⁕ 소량부터 대용량 Blood까지, 처리량에 따라 안정적인 DNA 수율 확보(약 4.6 – 813ug) ⁕ 고농도 blood에서도 단단한 pellet 형성 ⁕ - 20℃ 보관 후 1년간 PCR sensitivity 유지 검증
즉, Blood DNA Extraction에서 흔히 발생하는 문제를 “실험자가 해결하는“ 방식이 아닌, “시약이 먼저 안정화해주는 구조” 설계한 제품입니다.
“G-DEXTM IIb Workflow.” G-DEXTM IIb의 워크플로우는 Blood전용 시약답게 단순하며 재현성이 높습니다. ※ G-DEXTM IIb의 워크플로우 1.RBC Lysis Blood + RBC Lysis(3x) → 5분 incubation 2.Cell Lysis WBC 완전 용해 (RNase optional) 3.Proteion PPT PPT buffer + vortex 20초 → Centrifugation pellet → 단백질 pellet 분리 4.DNA Precipitation isopropanol로 DNA pellet 형성 5.Wash & Hydration 70% EtOH 세척 → 10-15분 건조 → 용해 G-DEXTM IIb는 Blood DNA Extraction 과정에서 변수가 발생하기 쉬운 단계들을 안정적으로 통제할 수 있도록 설계되었습니다.
[ 자주 문의 되는 Blood DNA Trouble-shooting ] 사례 1 – RBC 잔존 / 붉은 색 남음 : RBC
Lysis 1회
추가 + pellet 주변 잔여액 최소화
사례 2 – PPT pellet 불안정(흐릿함) : vortex 20초 + ice incubation 5-10분 사례 3 – 재용해가 오래 걸림 : Air dry와 같은 과건조 금지, 약간의 moist가 있을 때 멸균 swab으로 가볍게 닦아 낼 것 : Rehydration buffer 증량
및 warm-up
G-DEXTM IIb는 Blood DNA Extraction의 난이도를 낮추고 더 쉽게, 더 안정적으로, 많은 양의 DNA를 확보할 수 있도록 설계된 솔루션입니다. |
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