“클로닝도, 단백질 발현도! 이제 고민은 그만.
연구 목적에 맞는 셀을 인트론바이오가 찾아 드립니다.”
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고객 문의 및 답변
-실험 현장에서 가장 많이 나오는 질문, 인트론바이오가 답합니다.
Competent Cell FAQs
Q1. Competent Cell이 정확히 뭔가요?
A1. Competent Cell은 외부 DNA(플라스미드, PCR 산물 등)를 효율적으로 세포 내로 도입할 수 있도록 세포막 투과성이 강화된 대장균(E.coli) 세포입니다. 클로닝과 발현 연구에 필수적입니다.
Q2. Competent Cell은 언제 사용하나요?
A2. 주로 플라스미드 클로닝, 돌연변이 분석, DNA library 제작, 단백질 발현 연구, 백신 및 치료제 후보물질 개발 연구에 활용 됩니다.
Q3. DH5α 와 BL21은 어떻게 다른가요?
A3. 목적에 따라 사용 용도가 다르며, 선택적으로 사용해야 합니다.
- DH5α 는 DNA 작업에 최적화된 ‘클로닝 전용 세포’→ 플라스미드 안정성, DNA 수율, 재현성이 장점입니다.
- BL21은 단백질 연구에 최적화된 ‘발현 전용 세포’ → 이종 단백질 안정성 및 발현 효율이 장점입니다.
Q4. Competent Cell의 Transformation 효율은 왜 중요한가?
A4. Transformation 효율은 세포 1ug DNA당 형성되는 콜로니 수(cfu)로 표시됩니다.
- 고효율 (≥108 cfu/µg) → 소량 DNA로도 충분히 클로닝 가능
- 저효율 → DNA 양이 많아야 성공 가능성↑
즉, 성공률, 비용, 시간 절약에 직결됩니다.
왜 필요한가?
•유전자 클로닝 필수 도구 : 외부 유전자를 세포 안에 안정적으로 삽입 및 복제 가능.
•단백질 발현 : 목적 유전자를 발현시켜 단백질 생산 연구에 활용.
•분자생물학 연구 기반 : 유전자 편집, 라이브러리 제작, 백신/치료제 개발 기초 실험에 필요.
•재현성 보장 : 실험자 간 변동을 줄이고 안정적 데이터 확보.
>Competent Cell은 분자생물학, 유전공학, 합성생물학 연구의 출발점이자 핵심 재료입니다.
인트론바이오 Competent Cell
: 성공적인 클로닝과 단백질 발현의 시작
iNtRON의 Ez C-cell E.coli DH5α
- PROTOCOL
1. 준비
• 얼음에서
필요한 수의 DH5α
Competent cell 튜브를
꺼내어 해동합니다.
• 동시에,
알맞은
항생제가 포함된 LB agar plate를
37℃에서 예열해 둡니다.
2.
DNA첨가
• 해동된
세포에 1~5 µL의 DNA를
넣고, 튜브를 가볍게 두드려 섞습니다.
3. 얼음 위 보관
• 혼합물을
얼음 위에서 30분 동안 둡니다.
4.
Heat shock
• 혼합물을
42℃에서 90초
동안 열 충격 처리합니다.
5.
냉각
• 즉시
튜브를 다시 얼음 위에 옮겨 3분간 둡니다.
6. 배양 (Recovery)
• 튜브에
SOC배지 450
µL를
첨가하고, 37℃에서
1시간 동안 배양합니다.
• SOC배지는
쉽게 오염될 수 있으니 주의합니다.
7. 도말 (Plating)
• 배양액
50~100 µL를 예열해둔 agar
plate에
분주합니다.
• 멸균된
glass beads(5~6개)를
넣고 가볍게 흔들어 배양액을 고르게 펼친 후, beads를 버립니다.
8. 배양 (Incubation)
• plate를
37℃에서 12~16시간
동안
배양한
후 형성된 콜로니를
확인합니다.
▶ Normal Protocol TAT : 1시간
40분 (100분)
-
SUPERFAST PROTOCOL
1. 준비
• 얼음에서
필요한 수의 DH5α Competent
cell 튜브를 꺼내어 해동합니다.
• 동시에,
알맞은
항생제가 포함된 LB agar plate를
37℃에서 예열해 둡니다.
2. DNA첨가
• 해동된
세포에 1~5 µL의 DNA를
넣고, 튜브를 가볍게 두드려 섞습니다.
3.
도말
(Plating)
• 예열해둔
agar plate에 분주합니다.
• 멸균된
glass beads(5~6개)를
넣고 가볍게 흔들어 배양액을 고르게 펼친 후, beads를 버립니다.
4.
배양 (Incubation)
• plate를
37℃에서 12~16시간
동안 배양한 후 형성된 콜로니를
확인합니다.
▶ Fast
Protocol TAT : 5분
95% 시간 절약 / 약 20배
빠름
iNtRON의 Ez C-cell E.coli BL21(DE3)
- PROTOCOL
1. 준비
•
C-cell BL21(DE3) 튜브와
Enhancer Solution을
꺼내 얼음 위에서 해동합니다.
• 동시에,
LB agar plate에
적절한 항생제를 첨가하고 37℃에서
예열해 둡니다.
2. DNA첨가
• 해동된
C-cell에 Enhancer
Solution 20uL을
넣습니다.
• 이어서
DNA 1~5ul를 넣고, 튜브를
가볍게 두드려 섞습니다.
3.
얼음 위 보관
• 혼합물을
얼음 위에서 30분 동안 둡니다.
4. Heat shock
• 혼합물을
42℃에서 60초
동안 열 충격 처리합니다.
5. 냉각
• 즉시
튜브를 다시 얼음 위에 옮겨 3분간 둡니다.
6. 배양 (Recovery)
• 튜브에
SOC배지 450ul를
첨가하고, 37℃에서 1시간
동안 배양합니다.
• SOC배지는
쉽게 오염될 수 있으니 주의합니다.
7. 도말 (Plating)
• 배양액
50~100ul를 예열해둔 agar
plate에
분주합니다.
• 멸균된
glass beads(5~6개)를
넣고 가볍게 흔들어 배양액을 고르게 펼친 후, beads를 버립니다.
8. 배양 (Incubation)
• plate를
37℃에서 12~16시간
동안
배양한 후 형성된 콜로니를
확인합니다.
▶ 클로닝이
목표라면 ? Ez
C-cell DH5α
▶ 단백질
발현이 목적이라면? Ez
C-cell BL21
▶ 두
가지 다 필요하다면? 두 셀 모두 준비하세요,
연구
효율이 달라집니다.
“ 클로닝이든 발현이든, Ez C-cell만 있으면 EZ(이지)하게 해결됩니다 !”
