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RNA 분리, 왜 중요할까요?

 

RNA분리를 통해 우리는 세포 내에서 어떤 유전자가 발현되고 있는지, 어떤 질병과 관련된 유전자가 활성화되어 있는지 등을 파악할 수 있습니다. 즉, RNA분리는 생명 현상을 이해하고 다양한 질병을 진단하고 치료하는데  매우 중요한 역할을 합니다.

 

RNA 추출이 어려운 이유?

 

RNA 고유의 물리적·화학적 특성과 추출 과정의 민감성 때문입니다.

 

1. RNA의 구조적 불안정

• RNA는 단일 가닥(single-stranded)이며 2’-OH 그룹 때문에 DNA보다 화학적으로 불안정 합니다.

• 열, pH 변화, 금속 이온, UV 등에 의해 쉽게 분해 됩니다.

 

2. RNase 효소에 극도로 민감함

• RNase는 거의 모든 생물체와 환경에 존재하며, 효소 활성이 매우 강하고 저항성도 높습니다.

• 실험 중 아주 미세한 오염만으로도 RNA가 빠르게 분해되어 수율이 낮거나 품질이 급격히 떨어집니다.

 

3. 추출 조건과 시약의 변수

• lysis buffer, phenol/chloroform, column 정제 등의 화학적 조건이 미세하게 달라져도 RNA 순도와 농도에 큰 영향을 줍니다.

• Salt, Protein, DNA 등의 오염이 남아 있으면 260/280, 260/230 비율이 낮아져 품질 불량으로 판정됩니다.

 

4. 농도 낮고 손실률 높은 정제 단계

• RNA는 농도가 매우 낮은 경우가 많고, 정제 과정 중에도 일부가 손실됩니다.

 

이처럼 RNA는 양도 적고 쉽게 손상되며, 오염되기 쉬워 고품질 RNA 확보가 어려운 것입니다.

 

 

RNA를 성공적으로 추출하는 방법

 

1.RNase 오염 차단

• RNA는 RNase에 매우 민감하므로, RNase-free 장비, 팁, 튜브 사용해야 합니다.

• 작업대는 RNase 제거제로 닦고, 장갑을 착용해야 합니다.

 

2.신속한 시료 처리

• 조직, 세포는 즉시 냉동(-80℃) 또는 RNA stabilizer 처리합니다.

• RNA는 분해가 빠르므로 신속하게 처리하고 냉각을 유지해야 합니다.

 

3.Genomic DNA 오염방지

• Genomic DNA 제거가 중요하기 때문에 DNase를 처리해야 합니다 .

• DNA 오염은 downstream 실험(qPCR 등)에 큰 영향 줍니다.

 

4.순도 및 농도 확인

• 추출 후 NonoDrop 측정 (A260/A280 = 2.0, A260/A230 ≥ 2.0) 

• Bioanalyzer로 RIN 값 확인 (RIN ≥ 7.0 이상 권장)

 

5.보관 및 활용

• RNA는 -80℃에서 보관, 반복 동결-해동 금지합니다.

• 실험 전 aliquot으로 나누어 사용해야 합니다. 

 

easy-spin™ (DNA free) Total RNA Extraction Kit

 

RNA 추출에 일반적으로  Solution(Phenol) Type과 Spin Column Type으로 유형으로 나뉩니다. 

Solution Type 제품은 Spin Column Type 보다 수율이 높고 많은 양의 RNA를 추출할 수 있다는 장점이 있는 반면, 알코올 침전과정을 거쳐 불편함이 있습니다.

Column Type 제품은 Phenol을 사용하지 않고, 알코올 침전 과정을 거치지 않아 더 순수한 RNA를 추출 할 수 있습니다. 수율이 Solution을 사용할 때 보다 적지만 많은 샘플에서 RNA를 추출하거나 신속하게 추출할 수가 있습니다.

언급된 두 가지 유형 방식을 사용하여 추출한 RNA를 전기영동으로 확인하면 Genomic DNA가 오염되는 경우가 있습니다. 이는 lysis 단계에서 DNA가 충분하게 제거 되지 않기 때문에 발생합니다.

 

이 키트는 Solution type과 Column type 각각의 추출 방법에서 장점만을 결합한 Hybrid 제품으로 Solution type의 높은 수율과 Column type의 고순도 RNA를 빠르고 효율적으로 추출 할 수 있는 키트로 Genomic DNA처리 (DNA free)가 포함되어 있어 별도 DNase 처리 없이도 Genomic DNA 오염 없이 RNA 추출이 가능합니다.

phenol/chloroform을 사용하지 않아 안전하며, Column 기반 정제 방식을 통해 고순도 RNA를 30분 이내에 신속하게 추출 할 수 있습니다.

간편한 사용법으로 실험자 숙련도와 관계없이  안정적이 결과 도출이 가능합니다.

 

세포, 조직 등 다양한 시료에서 사용가능하며, qPCR, RT-PCR, Northern blot, RNA-seq 등 민감한 분석에 적합한 고품질 RNA를 제공합니다.

주요 특징으로는 높은 수율과 순도, 간편한 프로토콜, 오염 최소화, 시간 절약  등, 분자진단, 유전자 발현 분석, 병원체 검출 등 다양한 연구에 활용됩니다. 

 

  

 

 

 

[PROTOCOL] easy-spin™ (DNA free) Total RNA Extraction Kit

 

이 키트는 조직과 배양 시료로부터 Total RNA를 고순도로 빠르고 민감하게 추출할 수 있도록 설계되었습니다.