병원체가 어디에 숨어 있든, 그 안에서 원하는 바이러스나 세균의 DNA, RNA를 정확히 추출하는 것이 연구 및 진단검사 시작이고 핵심입니다.

 

특히 현장에 따라 분변, 조직, 소변, 전혈 등의 다양한 검체를 다루고, 그나마 검체양이 적거나 민감한 병원체를 다루는 경우에는 단순한 추출 방식만으로는 부족합니다.

 

1. 복잡한 검체 구조

전혈, 분변, 조직, 소변 등의 검체는 단순한 체액이 아닙니다.

전혈 샘플의 헤모글로빈, 면역 단백질 및 분변 샘플의 소화효소, 다당류(polysaccharides) 등 각종 불순물은 추출 효율은 물론 PCR 같은 후속 실험을 방해할 수 있습니다.

 

 

2. 낮은 병원체 농도

소변 샘플은 상대적으로 타겟 바이러스나 박테리아가 아주 소량으로 존재하는 경우가 많아,

일반적인 추출법으로는 검출이 어렵고, 고감도 추출 정제 시스템이 필요합니다.

 

 

3. RNase/DNase에 의한 분해 위험

RNA는 특히 분변, 소변 등의 시료에서 RNase에 의해 빠르게 분해되며,추출 과정이 느리거나 불완전할 경우 핵산 안정성 확보가 어렵습니다.

 

 

결론적으로 단계마다 손실 없이, 빠르고 깨끗하게 핵산을 얻는 것이 실험의 재현성과 신뢰도를 결정하는 필수 요소일 것이며, Patho Gene-spin™ HS DNA/RNA Extraction Kit는 최적의 선택입니다. 

 

 

Patho Gene-spin™ HS DNA/RNA Extraction Kit

 

이 키트는 혈액, 혈장, 혈청, 세포배양액, 소변, 분변, 감염 조직 등 폭넓은 시료 안에 포함된 바이러스, 박테리아 등 다양한 병원체로부터 DNA 및 RNA를 빠르고 민감하게 추출할 수 있도록 설계되었습니다.

 

각 추출단계에 필요한 lysis buffer, binding buffer, washing buffer A/B 및 elution buffer와 함께 고효율의 핵산 추출에 필수인 Proteinase K와 Carrier RNA, silica-gel membrane spin column으로 구성되어 있습니다.

 

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체크 포인트 !!

 

​Proteinase K는 핵산 추출 과정에서 사용하는 단백질 분해 효소입니다.

세포나 조직 내의 단백질을 효율적으로 분해하여, 불순물을 제거하고 순도를 높여주며 RNase/DNase 같은 분해효소를 불활성화하여 핵산 손실을 최소화 합니다.

 

Carrier RNA는 적은 양의 검체 또는 핵산 농도가 낮은 경우에 효과적입니다.

핵산이 column에 결합될 때, 양이 너무 적으면 손실이 발생하기 쉬운데, Carrier RNA가 함께 붙어 총 결합량을 늘려줌으로써 추출 효율을 높여줍니다.

또한, 핵산이 효소나 물리적 환경에 의해 쉽게 분해되는 것을 보호해 주며, 핵산이 column에 잘 결합되도록 돕고, 세척 단계에서도 안정적으로 유지될 수 있게 합니다. 

 

 

추출 과정

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STEP 1 : LYSIS & BINDING

 

1.  1.5 ml 튜브에 Proteinase K 5 µL를 넣습니다.

 

2.  시료 150 µL를 넣고 가볍게 vortex 합니다.

   : 시료는 swab, 세포 배양액, 혈액, 조직 homogenate, 소변, 분변, 혈장 등 다양하게 가능합니다.

   : 만약 시료 volume이 150 µL 보다 적은 경우 DEPC-treated water로 전체량을 맞춰주세요. 

 

  : [실험TIP] Lysis Buffer와 Carrier RNA는 전체 시료 개수에 따라 미리 섞어두고 사용하시면 편리합니다.

 

4.  56°C에서 10분간 반응을 시킵니다.

 

5.  Binding Buffer 300 µL를 넣고 잘 혼합 후, column에 용액을 옮기고 1분간 13,000rpm 원심분리합니다.

 

STEP 2 : WASHING

 

1.  Collection tube에 모인 용액을 버리고 다시 tube에 column 장착합니다.

 

2.  Washing Buffer A 500 µL를 넣고 1분간 원심분리 후, 1번 과정 반복

 

3.  Washing Buffer B 500 µL를 넣고 1분간 원심분리 후, 1번 과정 반복

 

4.  Column에 남은 에탄올을 제거하기 위해 빈 상태로 1분간 원심분리 

 

STEP 3 : ELUTION

 

1.  Column를 새로운 1.5mL tube에 장착 후 40~50 µL Elution Buffer를 column에 넣어 줍니다.

     시료 150 µL를 넣고 가볍게 vortex 합니다.

   : 50 µL 가 권장량이나 좀더 농축된 추출 과물이 필요할 시 40 µL 도 가능합니다.

   : 남아있는 에탄올이 elution 과정을 방해할 수 있으니 column을 완전히 dry 시켜주세요.

 

2.  상온에서 1분간 반응시킨 후, 1분간 13,000rpm 원심분리합니다.